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        質(zhì)譜技術(shù)具有較好的靈敏度、準(zhǔn)確度，能準(zhǔn)確測定蛋白質(zhì)。蛋白質(zhì)質(zhì)譜鑒定的基本原理是用蛋白酶(如trypsin, Glu-C等)將蛋白質(zhì)消化成肽段混合物，通過質(zhì)譜儀將具有特定質(zhì)核比的肽段離子分離開來。經(jīng)MAILDI軟電離手段將其離子化，過質(zhì)量分析器可得到每個(gè)肽段的m/z。蛋白質(zhì)所有肽段的m/z圖譜即蛋白質(zhì)的一級(jí)質(zhì)譜峰圖。根據(jù)參數(shù)設(shè)置選取信號(hào)強(qiáng)度較大的一些肽段離子進(jìn)行碎裂,得到更小的氨基酸序列片段，即為選取肽段的二級(jí)質(zhì)譜峰圖。
       通過實(shí)際譜圖和理論上蛋白質(zhì)經(jīng)過蛋白酶消化后產(chǎn)生的一級(jí)質(zhì)譜峰圖和二級(jí)質(zhì)譜峰圖進(jìn)行的比對(duì)，進(jìn)行蛋白鑒定。

        傳統(tǒng)的質(zhì)譜僅用于小分子揮發(fā)物質(zhì)的分析，但隨著新的離子化技術(shù)的出現(xiàn)，如基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時(shí)間質(zhì)譜（MALDI-TOF）和電噴霧電離質(zhì)譜（ESI-MS）等，各種質(zhì)譜技術(shù)的出現(xiàn)為蛋白質(zhì)分析提供了一種新的且準(zhǔn)確快速的途徑。目前，酶解、液相色譜分離、串聯(lián)質(zhì)譜及計(jì)算機(jī)算法的聯(lián)合應(yīng)用已成為鑒定蛋白質(zhì)的發(fā)展趨勢。
 
基質(zhì)輔助激光解吸附質(zhì)譜（MALDI-TOF）
        基質(zhì)輔助激光解吸附質(zhì)譜技術(shù)（Matrix-Assisted Laser Desorption/ Ionization Time Of Flight ）的基本原理是將分析物分散在基質(zhì)分子中并形成晶體，當(dāng)用激光照射晶體時(shí)，由于基質(zhì)分子經(jīng)輻射所吸收的能量，導(dǎo)致能量蓄積并迅速產(chǎn)熱，從而使基質(zhì)晶體升華，致使基質(zhì)和分析物膨脹并進(jìn)入氣相。MALDI所產(chǎn)生的質(zhì)譜圖多為單電荷離子，因而質(zhì)譜圖中的離子與多肽和蛋白質(zhì)的質(zhì)量有一一對(duì)應(yīng)關(guān)系。MALDI產(chǎn)生的離子常用飛行時(shí)間（TOF）檢測器來檢測，理論上講，只要飛行管的長度足夠，TOF檢測器可檢測分子的質(zhì)量數(shù)是沒有上限的，因此MALDI-TOF質(zhì)譜很適合對(duì)蛋白質(zhì)、多肽等生物大分子的研究。

技術(shù)流程



技術(shù)特點(diǎn)

1. MALDI TOF 鑒定方便、快速，可以同時(shí)做上百個(gè)斑點(diǎn)。
2. 主要用于純蛋白或簡單樣本的鑒定，如2DE斑點(diǎn)。
3. 成本較低。

樣品要求

1. 蛋白質(zhì)溶液：純度> 90%；蛋白質(zhì)總量> 5 ug，濃度> 0.1 ug/ul。
2. 雙向凝膠電泳點(diǎn)：考染、銀染點(diǎn)清晰可見。
3. SDS-PAGE膠條：單一蛋白質(zhì)，考染、銀染條帶清晰可見 。