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基因沉默細胞的建立

    RNA干擾技術(shù)理論上可以在任何動物模型上進行。通過制各針對靶基因mRNA不同區(qū)段的siRNA轉(zhuǎn)基因動物，有可能獲得對靶基因不同程度的沉默效果，從而可以模擬數(shù)量遺傳性狀。這一優(yōu)點是基因敲除技術(shù)所不具備的。此外，這種技術(shù)不需要復(fù)雜的過程，能夠在數(shù)周內(nèi)花費只有基因敲除動物的很少一部分就可以對基因功能進行研究。

RNA干擾基因敲除動物模型的問題在于siRNA載體導(dǎo)入的成功率較低，所涉及的dsRNA不能有效地沉默靶基因的轉(zhuǎn)錄。此外，有研究表明導(dǎo)入大量shRNA會影響內(nèi)源性miRNA的水平和活性。

技術(shù)原理

dsRNA或pre-miRNA被導(dǎo)入細胞后，能夠被一種特異的核酸內(nèi)切酶（Dicer）識別并切割成為小片段，這些片段在RNA解旋酶的作用下解鏈。繼之反義鏈在與體內(nèi)一些酶（包括內(nèi)切酶、外切酶、解旋酶等）結(jié)合形成RNA誘導(dǎo)的沉默復(fù)合物（RNA-Induced Silencing Complex，RISC），RISC與mRNA同源區(qū)進行特異性結(jié)合，若miRNA與mRNA的結(jié)合位點完全配對，則切割mRNA；若miRNA與mRNA的結(jié)合位點不完全配對，則抑制mRNA的翻譯。

應(yīng)用領(lǐng)域

1. 基因功能研究，活體生物上進行基因功能研究與驗證；

2. 基因治療，精確定位，靶向治療；

3. 構(gòu)建動物模型；

4. 改造和培育新品種。

服務(wù)流程

1.   細胞分型；

2.   細胞預(yù)實驗；

3.   針對沉默基因設(shè)計合適靶點；

4.   構(gòu)建慢病毒；

5.   shRNA、miRNA功能驗證實驗；

6.   慢病毒包裝；

7.   基因沉默細胞系的建立；

8.   細胞基因沉默檢測。

客戶提供

1. 目的基因序列；

2. 其他個性化定制要求，譬如啟動子、熒光標記基團、Tag標簽等選擇要求。

交付內(nèi)容

{C}1．{C}構(gòu)建完好的帶有目的基因的載體；

{C}2．{C}病毒滴度測定的熒光顯微照片和流式細胞數(shù)據(jù)；

{C}3．{C}基因沉默效果驗證結(jié)果。